背景知识
ChIP-seq(Chromatin Immunoprecipitation sequencing),染色质免疫共沉淀测序技术,是研究蛋白质与DNA相互作用的有力工具,通常用于组蛋白特异性修饰位点或转录因子结合位点的研究。将ChIP与二代测序技术相结合的ChIP-Seq技术,能够高效地在全基因组范围内检测与组蛋白、转录因子等互作的DNA区段。
组蛋白修饰ChIP-seq
染色质是由组蛋白八聚体和缠绕在上面的DNA组成的。组蛋白N端都有一段富含赖氨酸和精氨酸的“尾巴”,尾巴上的氨基酸可以被修饰酶催化添加各种修饰基团,如甲基、磷酸基、乙酰基和泛素等,这个过程称为“组蛋白修饰”。
转录因子ChIP-seq
转录因子(Transcription Factors, TFs)是指能够以序列特异性方式结合DNA并且调节转录的蛋白质。转录因子能与DNA序列上特定的基序(motif)结合,调控基因的表达。通过特异性的抗体结合转录因子,从而将转录因子结合的DNA序列富集下来建库测序,即可获得该转录因子可能调控的区域以及基因信息。
实验原理
通过特异性抗体,富集目的蛋白结合的DNA片段,并对其进行纯化与文库构建;然后对富集得到的DNA片段进行高通量测序。通过将获得的数百万条序列标签精确定位到基因组上,从而获得全基因组范围内与组蛋白、转录因子等互作的DNA区段信息。
技术路线
甲醛缓冲液处理样品:由客户提供,公司可以提供甲醛固定方法的文件。
样品的染色质抽提――染色质的超声波片断化――染色质前处理和免疫共沉淀――洗脱蛋白质-DNA复合物并释放DNA――纯化DNA――IP产物定量检测――建库――测序――分析
数据分析

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